LHX4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403801-ACT

LHX4 (LIM homeobox 4) é um fator de transcrição com domínio LIM que se liga ao DNA por meio de um motivo homeobox para coordenar a especificação do destino celular e a organogênese, com papéis de destaque em programas de desenvolvimento da hipófise e do sistema nervoso central. Ao atuar em parceria com outros reguladores transcricionais, o LHX4 ajuda a controlar redes de expressão gênica restritas a determinadas linhagens, que influenciam a diferenciação, a proliferação e o padrão de organização dos tecidos. A ruptura ou desregulação de LHX4 tem sido associada ao hipopituitarismo congênito e a anormalidades do desenvolvimento relacionadas, refletindo sua importância na formação do eixo endócrino e no desenvolvimento neuronal. Como regulador nuclear da transcrição, o LHX4 oferece um ponto de entrada acessível para estudar circuitos de regulação gênica e o cruzamento entre vias de desenvolvimento em sistemas modelo humanos.

LHX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LHX4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LHX4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LHX4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LHX4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LHX4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LHX4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LHX4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LHX4 em células tumorais com expressão de LHX4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.