leupaxin Double Nickaseプラスミド (h): sc-405101-NIC

ヒトLPXNは、パキシリンファミリーに属するLIMドメインアダプターであるルーパキシン（leupaxin）をコードしており、ルーパキシンは焦点接着に局在してインテグリンの結合（活性化）を下流シグナルへとつなぎます。細胞骨格複合体やチロシンキナーゼ複合体との相互作用を通じて、ルーパキシンは細胞接着、移動、メカノトランスダクションを調節し、焦点接着のターンオーバーやアクチン動態に影響を与えます。LPXN依存的なシグナルは、FAK/SRC、RhoファミリーGTPアーゼの制御、MAPKカスケードなどの経路と連携し、細胞運動や生存シグナルを協調的に制御します。ルーパキシン発現の変化や焦点接着シグナルの再配線は、がんにおける浸潤性表現型や、免疫細胞のトラフィッキング異常と関連づけられており、LPXNは接着に連動した疾患メカニズムを研究するうえで有用な結節点となります。

leupaxin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LPXN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LPXN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LPXNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LPXNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。