LEKTI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402594-ACT

SPINK5は、リンパ上皮性Kazal型関連インヒビター（LEKTI）をコードしている。LEKTIは多ドメイン型のセリンプロテアーゼ阻害因子であり、表皮カリクレインの活性を抑制することで、角層の結合性、落屑（剥離）の制御、およびバリア機能の完全性を維持する。LEKTIは、コルネオデスモソーム構成要素のプロテアーゼ依存的なプロセシングを調節することにより、ケラチノサイトの分化プログラムや表皮の炎症性シグナル伝達カスケードに影響を及ぼす。SPINK5/LEKTI活性の破綻は、皮膚バリア機能の低下と皮膚炎症への感受性亢進に関連しており、上皮恒常性およびプロテアーゼ—アンチプロテアーゼのバランスに関する研究において重要である。さらに皮膚に加えて、SPINK5の発現プロファイルは、バリア組織における上皮ストレス応答や、プロテオリシス駆動のリモデリングに関する研究にも有用な情報を与える。

LEKTI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPINK5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LEKTI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPINK5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPINK5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LEKTIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPINK5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLEKTI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPINK5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLEKTI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。