LATS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401312-ACT

LATS1 (large tumor suppressor kinase 1) é uma quinase central de serina/treonina na via de sinalização Hippo, que restringe a proliferação celular e promove a apoptose ao fosforilar efetores downstream fundamentais, como YAP/TAZ. Ao integrar sinais de densidade celular, polaridade, sinalização mecânica e entradas de GPCR, a LATS1 ajuda a manter a homeostase tecidual ao limitar programas transcricionais que impulsionam o crescimento e a transição epitélio–mesênquima. A atividade desregulada de LATS1 ou o comprometimento da via Hippo é frequentemente associado à inibição de contato alterada, instabilidade genômica e estados transcricionais oncogênicos em múltiplos contextos tumorais. Em células humanas, a função de LATS1 também está ligada à organização do citoesqueleto e ao controle do ciclo celular, tornando-a um nó útil para dissecar o crosstalk de sinalização que molda a proliferação e a diferenciação.

LATS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LATS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LATS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LATS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LATS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LATS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LATS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LATS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LATS1 em células tumorais com expressão de LATS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.