Laminin α-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401849-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Laminin α-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Laminin α-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Laminin α-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LAMA3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Laminin α-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Laminin α-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMA3 kodiert die Laminin-α3-Kette, einen Kernbestandteil von Laminin-332 in Basalmembranen, der die epitheliale Adhäsion, Polarität und Gewebearchitektur unterstützt. Laminin α3 interagiert mit Integrinen wie α3β1 und α6β4 und reguliert dadurch die Bildung von Hemidesmosomen, die Signalübertragung an Fokalkontakten sowie nachgeschaltete Signalwege einschließlich FAK/Src, PI3K–AKT und MAPK, die Migration und Überleben koordinieren. Über seine Rolle in der Organisation der extrazellulären Matrix und der Zell–Matrix-Kommunikation beeinflusst LAMA3 die Reepithelialisierung von Wunden, die Barriereintegrität und Programme der epithelialen Differenzierung. Eine veränderte Zusammensetzung von Laminin-332 oder eine Dysregulation von LAMA3 wird in Zusammenhängen untersucht, die epidermale Fragilitätsphänotypen, beeinträchtigte Adhäsion und Tumorzellinvasion bei epithelialen Malignomen betreffen.
Laminin α-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LAMA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LAMA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LAMA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LAMA3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.