Laminin α-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401849-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Laminin α-3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Laminin α-3ダブルニカースプラスミド（h）およびLaminin α-3ダブルニカースプラスミド（h2）は、LAMA3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Laminin α-3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Laminin α-3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMA3はラミニンα3鎖をコードしており、上皮の接着、極性、ならびに組織構築を支える基底膜中のラミニン-332の中核構成要素です。ラミニンα3はα3β1やα6β4などのインテグリンと相互作用し、ヘミデスモソームの組み立て、焦点接着におけるシグナル伝達、さらにFAK/Src、PI3K–AKT、MAPKといった下流経路を介して、遊走と生存を協調的に制御します。細胞外マトリックスの構築および細胞—マトリックス間コミュニケーションにおける役割を通じて、LAMA3は創傷治癒時の再上皮化、バリア機能の維持、上皮分化プログラムに影響します。ラミニン-332の組成変化やLAMA3の制御異常は、表皮の脆弱性表現型、接着不全、ならびに上皮由来悪性腫瘍における腫瘍細胞浸潤に関わる文脈で研究されています。
Laminin α-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LAMA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LAMA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LAMA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LAMA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。