Laminin α-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421376

概要

Lama3はラミニンα-3をコードしており、これは基底膜に組み込まれて上皮細胞の接着、極性、方向性をもった遊走を支えるラミニン-332の主要サブユニットです。インテグリンに結合し、ヘミデスモソーム構成要素と協調することで、ラミニンα-3はFAK/SRCやPI3K–AKTといった接着連関シグナル伝達経路を介して、フォーカルアドヒージョンのダイナミクスや細胞骨格の組織化の調節に寄与します。マウス組織では、Lama3は表皮—真皮の固定と上皮バリアの完全性に関与し、その制御異常は創傷治癒における再上皮化不全や、上皮—間質相互作用の変化といった文脈でしばしば研究されています。Lama3を標的とする実験モデルは、組織恒常性や疾患関連微小環境に関わる細胞外マトリックスの組み立て、細胞—マトリックスのメカノトランスダクション、基底膜リモデリングを解析するために用いられます。

Laminin α-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLama3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lama3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lama3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Laminin α-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Laminin α-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lama3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Laminin α-3の機能に不可欠なLama3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lama3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Laminin α-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLaminin α-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lama3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Laminin α-3 HDRプラスミド（m）および Laminin α-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLama3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLama3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。