Laminin α-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401162-ACT

LAMA2 codifica a laminina α-2, uma subunidade-chave de glicoproteína da matriz extracelular da laminina-211/221, que sustenta a arquitetura da membrana basal e a adesão célula–matriz. Por meio de interações com integrinas, distroglicano e outros componentes da matriz, a laminina α-2 regula a organização do citoesqueleto, a migração e a sinalização de sobrevivência em músculo e nervo periférico, influenciando vias como adesões focais, PI3K/AKT e MAPK. LAMA2 é altamente relevante para a integridade do músculo esquelético e a mielinização, e a expressão ou função alteradas estão associadas a fenótipos de distrofia muscular congênita e a características de neuropatia periférica. Em contextos de pesquisa, a atividade de LAMA2 é frequentemente estudada em modelos de remodelação da matriz extracelular, organização da junção neuromuscular e mecanotransdução.

Laminin α-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin α-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin α-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin α-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin α-2 em células tumorais com expressão de LAMA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.