Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Lamin B2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421446-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Lamin B2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Lamin B2ダブルニカースプラスミド（m）およびLamin B2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Lmnb2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Lamin B2 抗体 (F-8): sc-377379
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Lamin B2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421446-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lamin B2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421446-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのLmnb2は、核ラミナを構成する主要な中間径フィラメントであるラミンB2をコードしており、核膜に構造的支持を与えるとともに、核周辺クロマチンの組織化を助けます。ラミンB2は核構造の維持、DNA複製タイミング、ならびに有糸分裂後の核膜再構築に関与し、ラミナの動態を細胞周期の進行およびゲノム安定性と結び付けます。さらに、ラミナ関連ドメイン（LAD）との相互作用を介して、転写制御や高次クロマチン構造の形成にも寄与します。ラミンB2および関連するラミナ構成要素の制御異常は、ラミノパチーに加え、核の脆弱性、遺伝子発現プログラムの変容、ストレス応答といった広範な機構と関連しており、発生および変性の文脈で研究されています。
Lamin B2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Lmnb2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Lmnb2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Lmnb2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Lmnb2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。