Lamin A Plasmide Double Nickase (h): sc-400039-NIC

LMNA umano codifica la lamina A, un componente fondamentale della lamina nucleare che conferisce stabilità meccanica e organizza l'architettura della cromatina di ordine superiore alla periferia del nucleo. La lamina A partecipa alla regolazione del genoma attraverso i domini associati alle lamine (LAD), influenzando i programmi trascrizionali, la tempistica di replicazione del DNA e lo stato epigenetico, e sostiene l'integrità dell'involucro nucleare durante il ciclo cellulare. LMNA interagisce con le vie di segnalazione del danno al DNA e della meccanotrasduzione, collegando le forze del citoscheletro alla forma del nucleo e all'espressione genica. L'alterazione dell'omeostasi della lamina A è associata a diverse laminopatie, tra cui gli spettri di cardiomiopatia e distrofia muscolare, fenotipi di invecchiamento precoce e modifiche della morfologia nucleare rilevanti per la biologia del cancro e delle cellule staminali.

Lamin A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LMNA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LMNA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LMNA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LMNA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.