L-type Ca⁺⁺ CP γ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419413

概要

Cacng1 は、L型 Ca++ チャネルの補助サブユニットである γ1 をコードしており、興奮性組織における電位依存性カルシウムチャネル複合体の生物物理学的特性や膜上発現を調節する4回膜貫通型の膜タンパク質である。Ca++ 流入を調整することで、興奮―収縮連関、活動依存的シグナル伝達、ならびに筋の生理機能や細胞の興奮性を形作る下流の Ca++ 制御経路に影響を及ぼす。L型 Ca++ チャネル構成要素の制御異常は、神経筋および心機能に関連する表現型を伴うカルシウム恒常性の破綻と結び付けられており、Cacng1 はマウスモデルにおいてチャネル補助サブユニットの生物学を解析するための有用な遺伝子座である。機能解析では、γサブユニットがチャネルのゲーティング、トラフィッキング、ならびに Ca++ 依存的な転写応答とのカップリングにどのように影響するかがしばしば検討される。

L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCacng1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cacng1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cacng1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、L-type Ca++ CP γ1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、L-type Ca++ CP γ1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cacng1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• L-type Ca++ CP γ1の機能に不可欠なCacng1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cacng1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびL-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cacng1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  L-type Ca++ CP γ1 HDRプラスミド（m）および L-type Ca++ CP γ1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCacng1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCacng1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。