L-type Ca⁺⁺ CP γ1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419413

Panoramica

Cacng1 codifica la subunità ausiliaria γ1 del canale del Ca++ di tipo L, una proteina di membrana tetraspanning che modula le proprietà biofisiche e l’espressione in membrana dei complessi di canali del calcio voltaggio-dipendenti nei tessuti eccitabili. Regolando finemente l’ingresso di Ca++, influenza l’accoppiamento eccitazione–contrazione, la segnalazione dipendente dall’attività e le vie a valle regolate dal Ca++ che modellano la fisiologia muscolare e l’eccitabilità cellulare. Un’alterata regolazione dei componenti dei canali del Ca++ di tipo L è stata associata a perturbazioni dell’omeostasi del calcio correlate a fenotipi funzionali neuromuscolari e cardiaci, rendendo Cacng1 un locus utile per analizzare la biologia delle subunità ausiliarie dei canali in modelli murini. Gli studi funzionali spesso esaminano come le subunità γ influenzino il gating del canale, il traffico intracellulare e l’accoppiamento con risposte trascrizionali dipendenti dal Ca++.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cacng1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cacng1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cacng1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina L-type Ca++ CP γ1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cacng1 per lo studio della segnalazione di L-type Ca++ CP γ1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cacng1 critici per la funzione di L-type Ca++ CP γ1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cacng1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal L-type Ca++ CP γ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cacng1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal L-type Ca++ CP γ1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR L-type Ca++ CP γ1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cacng1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cacng1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.