L-Plastin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402131-ACT

O LCP1 codifica a L-plastina, uma proteína de agrupamento de actina expressa predominantemente em células hematopoéticas, que estabiliza a actina filamentosa e dá suporte à remodelação dinâmica do citoesqueleto. Ao regular a formação de lamelipódios, a adesão dependente de integrinas e a arquitetura da sinapse imune, a L-plastina influencia a ativação de leucócitos, a quimiotaxia e funções fagocíticas. Sua atividade se cruza com vias de sinalização que coordenam motilidade e adesão, incluindo efetores a jusante de PI3K e pequenas GTPases que conectam sinais de receptores à organização da actina. A expressão ou fosforilação desregulada de LCP1 tem sido associada a alterações no comportamento de células imunes e foi relatada em contextos de inflamação e invasividade de células cancerígenas, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de migração e infiltração tecidual.

L-Plastin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LCP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

L-Plastin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LCP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LCP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de L-Plastin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LCP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de L-Plastin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via L-Plastin em células tumorais com expressão de LCP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.