The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
L-ficolin双切口酶质粒(h2): sc-404837-NIC-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- L-ficolin 双切口酶质粒（h2）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- L-ficolin双切酶质粒（h2）和L-ficolin双切酶质粒（h22）编码针对FCN2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：L-ficolin: sc-130297，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
L-ficolin双切口酶质粒(h2) | sc-404837-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类FCN2基因编码L-纤凝素（L-ficolin），这是一种主要由肝脏产生的可溶性模式识别凝集素；它通过结合微生物及自身发生改变的碳水化合物基序并招募MASP蛋白酶，启动补体凝集素途径，进而驱动C4/C2活化、促进调理作用并触发炎症信号传导。L-纤凝素通过调节补体依赖性的清除、凝集以及与吞噬细胞的相互作用，在感染与无菌性炎症交界处维持先天免疫稳态。遗传变异或FCN2表达失调与感染性疾病易感性改变及炎症表型相关，支持其作为连接补体活性、肝脏急性期反应与宿主—病原体相互作用的关键分子节点。对FCN2进行基因编辑或建立扰动模型，可在相关细胞与体外体系中开展凝集素-补体激活、糖链依赖性识别及其下游免疫效应通路的机制研究。
L-ficolin 双切酶质粒（h2）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 FCN2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对FCN2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏FCN2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了FCN2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。