KV1.4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405990-ACT

KCNA4は、ヒトの電位依存性カリウムチャネルKV1.4をコードする遺伝子であり、Shaker関連のαサブユニットとして四量体チャネルを形成し、速い不活性化を示すA型K⁺電流を担います。活動電位の再分極、スパイク間隔、シナプス興奮性を調節することで、KV1.4は興奮性組織における活動依存的な膜電位制御に寄与します。チャネルの可用性やゲーティングは、リン酸化やタンパク質間相互作用によって調節され、輸送（トラフィッキング）や細胞表面での安定性に影響を及ぼすため、KCNA4は神経および心筋の興奮性を微調整するより広範なシグナル伝達過程とも結びつきます。KV1ファミリー電流のバランス異常は、モデル系において不整脈誘発機序、発作感受性、興奮性障害の研究に関連する電気シグナルの異常表現型と関連づけられています。

KV1.4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KCNA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KV1.4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KCNA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKCNA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KV1.4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKCNA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKV1.4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKCNA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKV1.4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。