Ksr-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402872-ACT

O KSR2 humano (Ksr-2) codifica uma proteína de ancoragem (scaffolding) que coordena a sinalização MAPK/ERK ao organizar as interações do módulo RAF–MEK–ERK, moldando a amplitude e a duração do sinal a jusante de receptores de fatores de crescimento. O KSR2 também se conecta à homeostase energética celular ao modular redes de sinalização de quinases que convergem para a regulação metabólica, ligando estímulos mitogênicos a processos responsivos a nutrientes. Por meio dessas conexões entre vias, alterações na atividade de KSR2 têm sido associadas à sinalização desregulada em contextos que envolvem controle de crescimento, diferenciação e metabolismo sistêmico. Consequentemente, o KSR2 é frequentemente estudado em modelos de integração de sinalização relevantes para fenótipos relacionados à obesidade, sensibilidade à insulina e regulação neuroendócrina.

Ksr-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KSR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ksr-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KSR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KSR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ksr-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KSR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ksr-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ksr-2 em células tumorais com expressão de KSR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.