Krs-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416738-ACT

O STK3 humano codifica a quinase de serina/treonina Krs-1 (também conhecida como MST2), um componente central da cascata de sinalização Hippo, que restringe a proliferação celular e sustenta a inibição por contato ao fosforilar quinases a jusante que regulam a transcrição dependente de YAP/TAZ. A Krs-1 também se conecta a processos responsivos ao estresse e apoptóticos por meio de saídas de sinalização impulsionadas por quinase, que influenciam a dinâmica do citoesqueleto, a polaridade celular e decisões de sobrevivência. A desregulação da atividade do STK3/da via Hippo é frequentemente estudada no contexto de controle de crescimento alterado, transições epitélio–mesênquima e reprogramação de vias de sinalização associadas a tumores. Essas características tornam o STK3 um nó útil para dissecar o crosstalk entre vias e programas transcricionais que governam a homeostase tecidual em modelos de células humanas.

Krs-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Krs-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Krs-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Krs-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Krs-1 em células tumorais com expressão de STK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.