KOR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402526

概要

OPRL1はノシセプチン／オルファニンFQ受容体（KOR-3とも呼ばれる）をコードしており、主にGi/Goに共役するクラスAのGPCRです。これによりアデニル酸シクラーゼ活性が抑制され、cAMPシグナルが低下し、イオンチャネルのコンダクタンスが調節されます。受容体の活性化はシナプス伝達と神経細胞の興奮性を制御し、神経ペプチドを介した疼痛処理、ストレス応答性、報酬回路、自律神経機能の調節に影響します。下流シグナルはMAPK/ERK経路、βアレスチン依存的なトラフィッキング、受容体の脱感作／内在化といった過程とも交差し、時間経過に伴う細胞応答の様式を形作ります。OPRL1/KOR-3シグナルの変調は神経精神疾患・神経行動学的表現型と関連づけられており、神経回路網の制御機構やGPCRシグナル伝達ダイナミクスを解明するためのメカニズム研究において重要です。

KOR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるOPRL1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、OPRL1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、OPRL1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KOR-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KOR-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、OPRL1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KOR-3の機能に不可欠なOPRL1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、OPRL1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KOR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKOR-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、OPRL1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KOR-3 HDRプラスミド（h）および KOR-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはOPRL1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のOPRL1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。