KIR4.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421234

Visão geral

Kcnj15 codifica a subunidade do canal de potássio retificador de entrada KIR4.2, uma proteína de membrana que contribui para a condutância de potássio e ajuda a estabilizar o potencial de membrana em repouso em células excitáveis e não excitáveis. Ao regular o fluxo de K+, o KIR4.2 pode influenciar o equilíbrio osmótico celular, a excitabilidade da membrana e processos de sinalização dependentes de íons que se cruzam com vias de transporte e com a homeostase eletrofisiológica. Alterações na atividade de canais de potássio são amplamente relevantes para estudos de transporte renal e epitelial, fisiologia neuronal e glial e redes de sinalização responsivas ao estresse. A desregulação do manejo de íons e do controle do potencial de membrana também está implicada em mecanismos subjacentes a respostas inflamatórias e disfunção tecidual, tornando o Kcnj15 um alvo útil para a investigação mecanística de vias em sistemas de modelo murino.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KIR4.2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kcnj15 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kcnj15, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kcnj15 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KIR4.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kcnj15 para a investigação da sinalização de KIR4.2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kcnj15 críticos para a função KIR4.2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kcnj15 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KIR4.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KIR4.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kcnj15. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KIR4.2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KIR4.2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kcnj15 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kcnj15 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.