KGA Lentiviral Activation Particles (h): sc-402575-LAC

Das humane GLS-Gen kodiert die Glutaminase, und die nierenständige Isoform KGA katalysiert in den Mitochondrien die Umwandlung von Glutamin zu Glutamat und Ammoniak. Dadurch werden Kohlenstoff und Stickstoff für den TCA-Zyklus, die Nukleotidsynthese und über Glutathion für das Redoxgleichgewicht bereitgestellt. Dieser enzymatische Schritt ist zentral für die Glutaminolyse und ist mit anaplerotischem Stoffwechsel, der Homöostase von Aminosäuren und zellulären Stressantworten koordiniert. Veränderte GLS/KGA-Aktivität wird häufig im Kontext metabolischer Umprogrammierung untersucht, einschließlich proliferativer Signalgebung, Anpassung an Hypoxie und dem Management oxidativen Stresses. Eine dysregulierte Glutaminnutzung und Glutamatproduktion wurde mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Tumormetabolismus, Neurobiologie und die Aktivierung von Immunzellen relevant sind, weshalb GLS ein häufiges Ziel zur Analyse von Signal- und Stoffwechselwegen ist.

KGA Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GLS-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

KGA Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GLS-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen KGA-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GLS-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.