KGA Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402575-LAC

Il gene umano **GLS** codifica per la glutaminasi e l’isoforma di tipo renale **KGA** catalizza, nei mitocondri, la conversione della glutamina in glutammato e ammoniaca, fornendo carbonio e azoto per il ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA), la sintesi dei nucleotidi e il mantenimento dell’equilibrio redox tramite il glutatione. Questo passaggio enzimatico è centrale nella glutaminolisi e si coordina con il metabolismo anaplerotico, l’omeostasi degli amminoacidi e le risposte cellulari allo stress. Alterazioni dell’attività di GLS/KGA sono spesso studiate nel contesto della riprogrammazione metabolica, inclusi i segnali proliferativi, l’adattamento all’ipossia e la gestione dello stress ossidativo. Una deregolazione dell’utilizzo della glutamina e della produzione di glutammato è stata collegata a meccanismi rilevanti per il metabolismo tumorale, la neurobiologia e l’attivazione delle cellule immunitarie, rendendo **GLS** un bersaglio comune per l’analisi delle vie metaboliche.

Le particelle di attivazione lentivirale KGA (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GLS in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KGA (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GLS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KGA. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GLS e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.