Keratin 24 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414948-ACT

KRT24 kodiert Keratin 24, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das zur strukturellen Integrität und mechanischen Widerstandsfähigkeit epithelialer Zellen beiträgt. Als Bestandteil des Keratin-Zytoskeletts ist KRT24 an der Organisation des Zytoskeletts, der Zell-Zell-Kohäsion sowie an epithelialen Differenzierungsprogrammen beteiligt, die die Gewebehomöostase und Barrierefunktion beeinflussen. Störungen in der Zusammensetzung des Keratinnetzwerks können Stressantwort-Signalwege und Umbauprozesse beeinflussen, die mit epithelialer Dysregulation verknüpft sind. Daher wird die KRT24-Expression häufig in Studien zur epithelialen Entwicklung sowie in krankheitsrelevanten Kontexten untersucht, in denen Differenzierungszustand und zytoskelettale Architektur verändert sind.

Keratin 24 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KRT24-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Keratin 24 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KRT24-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KRT24-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Keratin 24-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KRT24-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Keratin 24-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Keratin 24-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KRT24-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.