Keap1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400190-LAC

O KEAP1 humano codifica a Keap1, um adaptador de substrato do complexo ligase E3 de ubiquitina CUL3–RBX1 que controla a degradação proteassomal de NRF2 (NFE2L2) e, assim, ajusta as respostas ao estresse antioxidante e a xenobióticos. Ao detectar eletrófilos e espécies reativas de oxigênio por meio de domínios ricos em cisteína, a Keap1 regula o acúmulo nuclear de NRF2 e a transcrição de genes citoprotetores envolvidos no metabolismo da glutationa, na regeneração de NADPH e na desintoxicação de fase II. Esse eixo KEAP1–NRF2 integra a homeostase redox com a reprogramação metabólica, a sinalização inflamatória e a autofagia por meio de interações com proteínas como p62/SQSTM1. A desregulação do controle de NRF2 dependente de KEAP1 é frequentemente estudada em contextos da biologia do estresse oxidativo, incluindo carcinogênese, fenótipos associados à quimiorresistência e modelos de lesão tecidual crônica.

As Partículas de Ativação Lentivirais Keap1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de KEAP1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Keap1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição KEAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Keap1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo KEAP1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.