KCNT1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-432714-ACT

Kcnt1 は、マウスの KCNT1（ナトリウム活性化カリウム）チャネルをコードしており、細胞内 Na+ の上昇を膜の再分極および神経細胞の発火頻度の適応（アダプテーション）に結び付ける、大コンダクタンスの K+ チャネルです。活動電位後過分極（afterhyperpolarization）やバースト発火ダイナミクスを形成することで、KCNT1 はシナプス統合とネットワーク興奮性に影響し、イオン恒常性や活動依存性シグナル伝達を制御する経路と交差します。KCNT1 活性の変化は神経細胞の過興奮性表現型と関連しており、発作関連および神経発達障害の機序の文脈で研究されてきたことから、回路レベルの機能障害との関連性が支持されています。マウスモデルでは、Kcnt1 は KNa コンダクタンスが興奮—抑制バランスや可塑性をどのように調整するかを検証するための、扱いやすい標的（ノード）となります。

KCNT1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Kcnt1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KCNT1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Kcnt1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKcnt1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KCNT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKcnt1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKCNT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKcnt1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKCNT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。