Plásmido CRISPR de Activación (h) JNK1: sc-400048-ACT

MAPK8 codifica la quinasa N-terminal de c-Jun 1 (JNK1) humana, una quinasa MAP activada por estrés que fosforila factores de transcripción como c-JUN y modula programas génicos dependientes de AP-1. JNK1 integra señales procedentes de citocinas, estrés oxidativo, radiación UV y estrés del retículo endoplásmico para regular la apoptosis, la autofagia, la inflamación y el control del ciclo celular mediante la intercomunicación (crosstalk) entre MAPK y NF-κB. Esta vía contribuye a decisiones celulares que influyen en la transformación oncogénica, los procesos neurodegenerativos y fenotipos metabólicos e inflamatorios, lo que convierte a MAPK8 en un nodo ampliamente utilizado para el análisis mecanístico de vías de señalización. La señalización desregulada de JNK1 se ha vinculado con alteraciones de la señalización inmunitaria y de las redes de respuesta al estrés en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su utilidad en estudios de genómica funcional.

JNK1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPK8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

JNK1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPK8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPK8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de JNK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPK8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de JNK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía JNK1 en células tumorales con expresión de MAPK8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.