JNK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400048-ACT

MAPK8は、転写因子c-JUNなどをリン酸化し、AP-1依存的な遺伝子プログラムを調節するストレス応答性MAPキナーゼであるヒトc-Jun N末端キナーゼ1（JNK1）をコードします。JNK1は、サイトカイン、酸化ストレス、紫外線照射、小胞体ストレスからのシグナルを統合し、MAPKおよびNF-κBとのクロストークを介して、アポトーシス、オートファジー、炎症、細胞周期制御を調節します。この経路は、がん化（腫瘍性形質転換）、神経変性過程、代謝・炎症表現型に影響する細胞の意思決定に関与するため、MAPK8は機序解明のための経路解析で広く用いられるノードとなっています。JNK1シグナル伝達の破綻は、複数の疾患関連状況における免疫シグナルやストレス応答ネットワークの変調と関連づけられており、機能ゲノミクス研究における有用性を裏付けています。

JNK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPK8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

JNK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPK8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPK8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性JNK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPK8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJNK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPK8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJNK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。