JMJD1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404249-ACT

KDM3B（JMJD1B）は、JmjCドメインをもつヒストン脱メチル化酵素をコードしており、主として抑制的なH3K9メチル化マークを除去することで、クロマチンのアクセシビリティを高め、転写活性化を促進します。JMJD1Bはエピジェネティックな状態を再編成することにより、系譜特異的な遺伝子プログラム、細胞分化、ならびに増殖やストレス応答の文脈依存的な制御に影響を及ぼします。その活性は、より広範なクロマチン制御ネットワークと連携し、シグナル依存的な転写を調節しうるため、代謝および発生の手がかりを遺伝子発現の出力へと結び付けます。KDM3Bの機能異常は複数の疾患文脈で報告されており、ヒト細胞におけるエピジェネティック制御機構や異常な転写状態を解明するための機構研究の標的として有用です。

JMJD1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KDM3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

JMJD1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KDM3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKDM3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性JMJD1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKDM3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJMJD1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKDM3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJMJD1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。