JMJD1B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404249-ACT

KDM3B (JMJD1B) kodiert eine Histon-Demethylase mit JmjC-Domäne, die hauptsächlich repressive H3K9-Methylierungsmarken entfernt, um die Chromatinzugänglichkeit und die transkriptionelle Aktivierung zu fördern. Durch die Umgestaltung epigenetischer Landschaften beeinflusst JMJD1B linien-/zelltypspezifische Genprogramme, die zelluläre Differenzierung sowie eine kontextabhängige Kontrolle von Proliferation und Stressantworten. Seine Aktivität ist in umfassendere Netzwerke der Chromatinregulation eingebunden und kann signalwegabhängige Transkription modulieren, wodurch metabolische und entwicklungsbiologische Signale mit den resultierenden Genexpressionsmustern verknüpft werden. Eine Fehlregulation von KDM3B wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der epigenetischen Kontrolle und aberranter Transkriptionszustände in menschlichen Zellen macht.

JMJD1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KDM3B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

JMJD1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KDM3B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KDM3B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen JMJD1B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KDM3B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von JMJD1B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des JMJD1B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KDM3B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.