Plasmide CRISPR d'Activation (h) JIP-2: sc-403514-ACT

MAPK8IP2 code pour JIP-2, une protéine d’échafaudage cytoplasmique qui organise des modules de signalisation MAPK, en particulier la voie JNK (MAPK8/9/10), en coordonnant les interactions entre les kinases en amont et les effecteurs en aval. En modulant la dynamique spatio-temporelle des cascades de kinases activées par le stress, JIP-2 contribue à la régulation de l’apoptose, des réponses inflammatoires, ainsi que des processus de différenciation neuronale et de trafic intracellulaire. L’activité de MAPK8IP2 est fréquemment étudiée dans le cadre des interactions (« cross-talk ») entre voies de transduction du signal, qui influencent la fonction synaptique et la résistance cellulaire au stress. Une dérégulation des réseaux de signalisation centrés sur JNK impliquant JIP-2 a été associée à des mécanismes pertinents pour la neurobiologie et la neurodégénérescence, ainsi qu’à des contextes plus larges de signalisation du stress impliqués dans de multiples modèles de maladies.

JIP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK8IP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JIP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK8IP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK8IP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JIP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK8IP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JIP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JIP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK8IP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.