JAB1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401302-ACT

COPS5はJAB1（CSN5とも呼ばれる）をコードしており、JAB1はCOP9シグナロソームの触媒サブユニットとして、脱NEDD8化（deneddylation）を介してカリン-RING型ユビキチンリガーゼを制御し、その結果としてプロテオスタシスと細胞周期進行を形作る。JAB1は、主要なシグナル伝達因子やチェックポイントタンパク質のユビキチン依存的分解回転を調節することで、DNA損傷応答、転写制御、ならびに細胞のストレス適応に関連する経路に影響を及ぼす。さらにJAB1は核内受容体シグナル伝達や免疫関連の転写プログラムとも連携し、状況に応じた遺伝子発現の協調に寄与する。COPS5/JAB1活性の破綻は、複数のがん関連モデルにおいて、増殖能の変化、生存シグナルの亢進、浸潤性表現型などと関連づけられており、腫瘍化回路の機構解析研究で頻繁に標的とされている。

JAB1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COPS5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

JAB1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COPS5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOPS5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性JAB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOPS5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるJAB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOPS5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるJAB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。