ITM2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421189

概要

Itm2b は、膜貫通型膜タンパク質 ITM2B（BRI2 とも呼ばれる）をコードしており、分泌系およびエンドリソソーム系における膜輸送やタンパク質分解処理に関与する II 型膜貫通タンパク質です。ITM2B は神経細胞の恒常性維持に関与し、APP（アミロイド前駆体タンパク質）のプロセシングに影響を与える相互作用を介して、アミロイド産生ペプチドの生成制御に関連づけられています。マウスでは Itm2b の発現は神経系で高く、シナプス維持、タンパク質品質管理、リソソーム機能を制御する経路の研究に用いられています。ITM2B の生物学的特性の変化は神経変性に関連する表現型と結び付いており、プロテオスタシスの破綻や加齢関連の神経病理を調べるための機序的な足がかりを提供します。

ITM2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるItm2b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Itm2b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Itm2bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ITM2Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ITM2Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Itm2b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ITM2Bの機能に不可欠なItm2bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Itm2bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ITM2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびITM2B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Itm2b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ITM2B HDRプラスミド（m）および ITM2B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはItm2bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のItm2b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。