IRGM Double Nickase Plasmid (h): sc-407889-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRGM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRGM Double-Nickase-Plasmid (h) und IRGM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IRGM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRGM Double Nickase Plasmid (h) | sc-407889-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRGM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407889-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IRGM (immunitätsbezogene GTPase M) ist eine beim Menschen interferoninduzierbare GTPase, die selektive Autophagie und die angeborene Immunabwehr koordiniert. Sie spielt eine wichtige Rolle bei der Xenophagie intrazellulärer Pathogene sowie bei der Regulation der Bildung und Reifung von Autophagosomen. IRGM interagiert mit der Autophagie-Maschinerie und Membrantransportwegen und beeinflusst dadurch sowohl die Eliminierung von Bakterien als auch die Modulation entzündlicher Signalwege. Genetische und funktionelle Studien haben eine mit IRGM assoziierte Fehlregulation der Autophagie mit veränderten Wirt–Mikroben-Interaktionen und chronisch-entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter auch Suszeptibilitätssignale, die bei entzündlichen Darmerkrankungen und verwandten mukosalen Immunstörungen beschrieben wurden. Als Knotenpunkt zwischen Autophagie, Pathogenerkennung und Zytokinantworten wird IRGM häufig in Studien zur zellulären Stressanpassung, zur antimikrobiellen Restriktion und zur entzündlichen Homöostase untersucht.
IRGM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IRGM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IRGM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IRGM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IRGM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.