IRG1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421149-ACT

マウスAcod1は、免疫応答遺伝子1（IRG1）をコードしており、これは活性化マクロファージやその他の骨髄系細胞において、Toll様受容体およびインターフェロンシグナルによって誘導されるミトコンドリア酵素です。IRG1は、TCA回路の調節、コハク酸脱水素酵素の阻害、ならびに活性酸素種（ROS）およびNRF2依存性の抗酸化プログラムへの影響を介して細胞の免疫代謝を再編する代謝産物イタコン酸の産生を触媒します。これらの経路を通じて、Acod1は炎症性活性化を、サイトカイン産生や抗微生物状態に影響する代謝リプログラミングへと結び付けます。IRG1–イタコン酸シグナルの破綻は、感染、慢性炎症、免疫駆動性の組織障害モデルなどの文脈において、自然免疫応答の変化と関連づけられています。

IRG1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Acod1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IRG1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Acod1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAcod1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IRG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAcod1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIRG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAcod1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIRG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。