Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IQGAP1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-424375-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IQGAP1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- IQGAP1ダブルニカースプラスミド（m）およびIQGAP1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Iqgap1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IQGAP1 抗体 (C-9): sc-376021
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IQGAP1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-424375-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IQGAP1 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-424375-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのIqgap1は、アクチン細胞骨格のリモデリングを膜輸送やシグナル伝達と協調させる、多ドメイン型の足場（スキャフォールド）タンパク質であるIQGAP1をコードします。IQGAP1はCDC42やRAC1などの低分子GTPアーゼに結合し、βカテニン、カルモジュリン、MAPK関連因子とも相互作用して、細胞極性、接着、遊走、サイトカイネシスを制御します。これらの相互作用を通じて、接着結合の安定性と動的な細胞骨格再編成を制御する経路の統合に寄与し、組織形態形成や免疫細胞の運動性の研究で頻繁に扱われるプロセスに関与します。IQGAP1関連シグナルの破綻や細胞—細胞接着プログラムの変化は、炎症、線維化、がん関連表現型のモデルで一般的に検討されており、疾患機序研究における重要性を裏づけています。
IQGAP1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Iqgap1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Iqgap1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Iqgap1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Iqgap1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。