IPMK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427508

Visão geral

O gene Ipmk de camundongo codifica a inositol polifosfato multiquinase (IPMK), uma enzima multifuncional que fosforila fosfatos de inositol e contribui para a geração de polifosfatos de inositol de ordem superior envolvidos na transdução de sinal. A IPMK faz interface com o metabolismo de fosfoinositídeos e de fosfatos de inositol, impactando a sinalização nuclear, a regulação transcricional e vias de homeostase energética celular, como a via PI3K/AKT e a sinalização associada ao mTOR. Por meio dessas funções, a IPMK influencia processos que incluem controle de crescimento, respostas ao estresse e regulação metabólica, e tem sido estudada em contextos nos quais a desregulação da sinalização por fosfatos de inositol está ligada a redes de sinalização associadas ao câncer e a fenótipos de doenças metabólicas. Sua ampla conectividade em vias torna o Ipmk um alvo útil para dissecar como mensageiros derivados do inositol coordenam a expressão gênica e decisões de destino celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IPMK (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ipmk em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ipmk, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ipmk na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IPMK.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ipmk para a investigação da sinalização de IPMK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ipmk críticos para a função IPMK
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ipmk para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo IPMK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo IPMK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ipmk. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo IPMK Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR IPMK (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ipmk para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ipmk definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.