Integrin αL/ITGAL/CD11a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402246-ACT

ITGAL はインテグリンαL（CD11a）をコードしており、インテグリンβ2（CD18）とヘテロ二量体を形成して LFA-1 となります。LFA-1 は白血球における主要な接着受容体で、ICAM ファミリーのリガンドに結合することで強固な接着と血管外への移行（トランスミグレーション）を媒介します。また、アクチン細胞骨格を再編成する外向き（outside-in）シグナル伝達を統合し、免疫シナプス形成を支え、T 細胞活性化の閾値を調節します。ITGAL の活性は、ケモカイン受容体下流や TCR シグナル伝達下流のインテグリン内向き（inside-out）シグナル伝達によって制御されており、白血球のトラフィッキング、抗原認識、炎症応答と結び付いています。ITGAL/LFA-1 機能の破綻は、自己免疫疾患や炎症性疾患の文脈、ならびに腫瘍—免疫相互作用において、免疫細胞の接着やシグナル伝達の異常と関連づけられており、機構免疫学研究における有用な着目点（ノード）となっています。

Integrin αL/ITGAL/CD11a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGALの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin αL/ITGAL/CD11a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGAL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGAL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin αL/ITGAL/CD11aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGAL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin αL/ITGAL/CD11a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGAL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin αL/ITGAL/CD11a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。