Integrin α9/ITGA9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402221-NIC

ヒトITGA9はインテグリンα9をコードしており、これは主にβ1とヘテロ二量体を形成して、細胞表面受容体として細胞外マトリックス（ECM）リガンドやガイダンス因子への接着を媒介するαサブユニットです。インテグリンα9/ITGA9は、外向き（outside-in）および内向き（inside-out）シグナル伝達を統合し、FAK/Src、PI3K–AKT、MAPKなどのシグナル経路を介して、細胞骨格の再編成、フォーカルアドヒージョンのターンオーバー、ならびに方向性のある細胞移動に影響を与えます。細胞—マトリックス相互作用を制御することで、ITGA9は上皮細胞および間葉系細胞の運動性、組織リモデリング、リンパ系や神経関連の応答などの過程に寄与します。インテグリンシグナルの破綻やITGA9発現の変化は、炎症、線維化、腫瘍に伴う浸潤・転移などの文脈で検討されており、接着依存的シグナルの機序研究において重要な標的となっています。

Integrin α9/ITGA9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。