Integrin α9/ITGA9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402221-ACT

ITGA9 はインテグリンα9（integrin α9）をコードしており、これはインテグリンβ1とヘテロ二量体を形成して、テネイシンC、オステオポンチン、VCAM1 などの細胞外マトリックス（ECM）リガンドへの接着を媒介する細胞表面受容体となるαサブユニットです。インテグリンα9β1のシグナル伝達は、FAK/SRC、PI3K–AKT、RhoファミリーGTPアーゼを含む経路を介して、細胞骨格リモデリング、フォーカルアドヒージョンのダイナミクス、細胞遊走を協調的に制御し、その結果として組織リモデリングや炎症細胞のトラフィッキングに影響を与えます。ITGA9 の活性は血管新生、創傷修復、リンパ管弁の発生などの過程に関与するとされ、発現の変化は線維化、慢性炎症、腫瘍細胞の浸潤性といった文脈で研究されています。メカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）に関連する受容体として、インテグリンα9は、ECMの組成や硬さが細胞挙動をどのように規定するかを検討するうえで有用な手がかりとなります。

Integrin α9/ITGA9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGA9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin α9/ITGA9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGA9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGA9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin α9/ITGA9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGA9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin α9/ITGA9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGA9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin α9/ITGA9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。