Integrin α4/ITGA4/CD49d Double Nickaseプラスミド (h): sc-401336-NIC

ITGA4はインテグリンα4（CD49d）をコードしており、β1またはβ7と会合してα4β1およびα4β7ヘテロ二量体を形成する接着受容体です。これらは白血球のトラフィッキング、強固な接着、内皮細胞間隙を通る移行（経内皮移動）を制御します。インテグリンα4はVCAM1やフィブロネクチンなどのリガンドに結合することで、細胞骨格の再構築や生存経路と連動するアウトサイドインシグナル伝達を調整し、フォーカルアドヒージョン、PI3K–AKT、MAPKシグナル伝達などに関与します。ITGA4の活性は組織内での免疫細胞の配置に寄与し、細胞—細胞および細胞—マトリックス相互作用を調節することで炎症性微小環境にも影響を与えます。インテグリンα4依存的な接着・遊走の破綻は、慢性炎症性疾患や血液悪性腫瘍の生物学に関与するとされており、免疫と腫瘍—間質相互作用の研究における注目ターゲットとしての有用性を裏付けています。

Integrin α4/ITGA4/CD49d ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。