Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α4/ITGA4/CD49d: sc-401336-ACT

ITGA4 code l’intégrine α4 (CD49d), une sous-unité α qui s’associe à β1 ou β7 pour former les intégrines VLA-4 (α4β1) ou α4β7, qui assurent l’adhésion cellule–cellule et cellule–matrice. En se liant à VCAM1, au domaine CS-1 de la fibronectine et à MAdCAM1, l’intégrine α4 régule le trafic des leucocytes, l’adhésion ferme et la migration transendothéliale, en intégrant la signalisation « outside-in » au remodelage du cytosquelette. La signalisation liée à ITGA4 recoupe les voies des adhésions focales, MAPK et PI3K, et influence la survie, l’activation et le comportement migratoire dans les compartiments immunitaires et stromaux. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ITGA4 sont fréquemment étudiées dans le recrutement des cellules inflammatoires, l’infiltration tissulaire associée aux maladies auto-immunes et les interactions tumeur–microenvironnement impliquant la dissémination métastatique et le positionnement des cellules immunitaires.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α4/ITGA4/CD49d. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α4/ITGA4/CD49d au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α4/ITGA4/CD49d dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.