Integrin β2/ITGB2/CD18 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400921-NIC

ITGB2 はインテグリンβ2（CD18）をコードしており、白血球に特異的に発現する接着受容体サブユニットである。これはα鎖（例：ITGAL/CD11a、ITGAM/CD11b、ITGAX/CD11c）と会合してβ2インテグリンを形成し、免疫細胞のトラフィッキングやエフェクター機能を制御する。これらのヘテロ二量体は、細胞骨格リモデリング、フォーカルアドヒージョン動態、MAPK/PI3K関連経路に結びついたアウトサイドイン／インサイドアウトのシグナル伝達を介して、内皮への強固な接着、内皮通過（経内皮移行）、免疫シナプス形成を調節する。CD18 依存的な ICAM ファミリーリガンドとの相互作用は、炎症時の好中球およびリンパ球のリクルートを協調させ、貪食や酸化バーストのプログラム形成にも影響する。ITGB2 の遺伝学的または機能的な撹乱は白血球接着異常や炎症応答の変化と関連しており、宿主防御や免疫調節異常の機序を研究するうえで重要な標的である。

Integrin β2/ITGB2/CD18 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。