Plasmide CRISPR d'Activation (m) Integrin β1/ITGB1: sc-421171-ACT

Le gène murin *Itgb1* code l’intégrine β1 (ITGB1), une sous-unité centrale de récepteur d’adhérence qui forme des hétérodimères avec de multiples intégrines α afin de permettre la liaison à des ligands de la matrice extracellulaire tels que la fibronectine, le collagène et les laminines. Via l’assemblage des adhérences focales, ITGB1 coordonne le remodelage du cytosquelette d’actine et une signalisation bidirectionnelle intégrant les voies FAK/Src, PI3K–AKT, MAPK/ERK et des GTPases Rho, afin de réguler la migration, la survie, la prolifération et la mécanotransduction. Les dynamiques d’adhérence dépendantes d’ITGB1 influencent les transitions épithélio‑mésenchymateuses, le comportement des cellules souches/progénitrices, le trafic des cellules immunitaires et l’organisation tissulaire au cours du développement et de la réparation. Une signalisation ITGB1 dérégulée et une interaction altérée avec la matrice sont fréquemment étudiées dans des modèles de fibrose, d’inflammation, de neurobiologie et de progression tumorale, où des programmes d’adhérence et d’invasion modifiés remodèlent le contrôle de l’état cellulaire.

Integrin β1/ITGB1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Itgb1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin β1/ITGB1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Itgb1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Itgb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin β1/ITGB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Itgb1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin β1/ITGB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin β1/ITGB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Itgb1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.