INSIG-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401381-NIC

INSIG1は、インスリン誘導遺伝子1（INSIG-1）をコードしており、ステロールセンサーとして機能するとともに、脂質恒常性の主要な負の制御因子となる小胞体膜タンパク質です。INSIG-1はSCAPおよびステロール調節エレメント結合タンパク質（SREBP）に結合し、ステロールが十分に存在する条件下でSCAP–SREBP複合体を小胞体（ER）に保持することで、SREBPのプロセシングと、それに続くコレステロールおよび脂肪酸生合成遺伝子の転写を抑制します。この制御点を通じて、INSIG-1はメバロン酸経路および脂肪新生（リポジェネシス）経路におけるフィードバック制御を統合し、さらにステロール経路構成要素のER関連分解（ERAD）とも交差します。INSIG1に関連するステロール感知機構の破綻は、脂質異常症、肝脂肪化、インスリン抵抗性といった代謝表現型で研究されており、また脂質代謝の変化が細胞のストレス適応を支えるような状況においても関連があります。

INSIG-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における INSIG1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、INSIG1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、INSIG1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、INSIG1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。