Ini1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423027-ACT

O Smarcb1 de camundongo codifica a Ini1 (também conhecida como SNF5/BAF47), uma subunidade central do complexo SWI/SNF (BAF) de remodelamento de cromatina dependente de ATP, que regula o posicionamento de nucleossomos e programas transcricionais que controlam a progressão do ciclo celular, a especificação de linhagens e a diferenciação. A Ini1 ajuda a coordenar a acessibilidade de enhancers e promotores, integrando sinais de vias de sinalização ao estado da cromatina para modular redes de expressão gênica envolvidas no desenvolvimento e nas respostas a danos no DNA. A disrupção da função de SMARCB1/INI1 está associada a alterações na regulação epigenética e à proliferação aberrante, e a perda de subunidades do SWI/SNF é uma característica recorrente em múltiplos tipos de tumores. Como regulador central da cromatina, o Smarcb1 é frequentemente estudado em vias que governam o equilíbrio entre repressão/ativação transcricional, o controle de checkpoints e a arquitetura da cromatina.

Ini1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Smarcb1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ini1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Smarcb1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Smarcb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ini1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Smarcb1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ini1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ini1 em células tumorais com expressão de Smarcb1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.