IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401045-ACT

CSF2RB kodiert die gemeinsame β‑Untereinheit, die von den Rezeptorkomplexen für IL‑3, IL‑5 und GM‑CSF geteilt wird, und bildet zusammen mit ligandspezifischen α‑Ketten auf hämatopoetischen und myeloischen Zellen eine hochaffine Signalgebungseinheit. Nach Bindung des Zytokins initiiert die IL‑3/IL‑5/GM‑CSF‑Rezeptor‑β‑Kette die JAK2/STAT5‑Signalübertragung und koordiniert die PI3K‑AKT‑ sowie MAPK/ERK‑Kaskaden, um Überleben, Proliferation, Differenzierung und funktionelle Aktivierung von Vorläuferzellen zu regulieren. Dieser Rezeptorknotenpunkt ist zentral für zytokingesteuerte Entzündungs‑ und Immunprogramme und verknüpft die Knochenmarkproduktion mit peripheren Effektorantworten. Eine fehlregulierte CSF2RB‑Signalgebung wird im Kontext aberranter Myelopoese, veränderter Leukozytenaktivierung und entzündlicher Krankheitsmechanismen untersucht.

IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CSF2RB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CSF2RB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CSF2RB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-3/IL-5/GM-CSFRβ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CSF2RB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-3/IL-5/GM-CSFRβ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-3/IL-5/GM-CSFRβ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CSF2RB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.