IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401045-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR活性化プラスミド（h）およびIL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CSF2RB転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: IL-3/IL-5/GM-CSFRβ 抗体 (1C1): sc-21765
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-401045-ACT | 20 µg | $397.00 |
CSF2RBは、IL-3、IL-5、GM-CSF受容体複合体で共有される共通βサブユニットをコードしており、造血系および骨髄系細胞において、リガンド特異的なα鎖と高親和性のシグナル伝達ユニットを形成します。サイトカインが結合すると、IL-3/IL-5/GM-CSF受容体βはJAK2/STAT5シグナルを開始し、PI3K–AKTおよびMAPK/ERKカスケードを協調的に制御することで、前駆細胞の生存、増殖、分化、ならびに機能的活性化を調節します。この受容体ノードは、サイトカイン駆動性の炎症・免疫プログラムの中核を担い、骨髄での産生（アウトプット）を末梢でのエフェクター応答へと結び付けます。CSF2RBシグナルの破綻（異常）は、異常な骨髄系造血、白血球活性化の変化、炎症性疾患の機序との関連で研究されています。
IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CSF2RBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
IL-3/IL-5/GM-CSFRβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CSF2RB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCSF2RB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IL-3/IL-5/GM-CSFRβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCSF2RB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIL-3/IL-5/GM-CSFRβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCSF2RB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIL-3/IL-5/GM-CSFRβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。