IL-1RII Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421099-ACT

O gene Il1r2 de camundongo codifica o receptor de interleucina-1 tipo II (IL-1RII), um receptor “iscas” de alta afinidade que se liga a IL-1α e IL-1β para limitar a sinalização produtiva via IL-1R1. Ao sequestrar os ligantes e modular a disponibilidade do complexo receptor, o IL-1RII molda a ativação imune inata e programas transcricionais inflamatórios ligados às saídas das vias NF-κB e MAPK. A expressão de IL-1RII é regulada de forma dinâmica nos compartimentos mieloide e estromal, influenciando redes de citocinas, o recrutamento de leucócitos e a resolução da inflamação. O controle desregulado do eixo de IL-1, incluindo níveis alterados de IL-1RII, tem sido associado a fenótipos inflamatórios crônicos e patologia imunomediada em modelos experimentais de doença em camundongos.

IL-1RII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il1r2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-1RII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il1r2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il1r2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-1RII. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il1r2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-1RII no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-1RII em células tumorais com expressão de Il1r2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.