IL-1 beta/IL1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400078-ACT

IL1B codifica l’interleuchina-1 beta (IL-1β), una citochina pro-infiammatoria prodotta principalmente da monociti e macrofagi attivati e processata nella sua forma matura in seguito alla scissione da parte della caspasi-1 dipendente dall’inflammasoma. La segnalazione di IL-1β attraverso IL1R1 e IL1RAP attiva vie dipendenti da MyD88 che convergono sulle cascate di NF-κB e MAPK, promuovendo programmi trascrizionali coinvolti nel reclutamento dei leucociti, nella febbre e nelle risposte di fase acuta. Questo asse modula l’attivazione dell’immunità innata, le risposte infiammatorie associate alla piroptosi e il crosstalk con citochine come IL-6 e TNF. Un’espressione deregolata di IL1B e un’attività anomala dell’inflammasoma sono implicate in patologie infiammatorie croniche e autoimmuni, nell’infiammazione metabolica e nell’infiammazione associata ai tumori in molteplici contesti tissutali.

IL-1 beta/IL1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-1 beta/IL1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-1 beta/IL1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-1 beta/IL1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-1 beta/IL1B nelle cellule tumorali con espressione di IL1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.