IGFBP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421063-ACT

O gene murino **Igfbp2** codifica a proteína ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina 2 (**IGFBP2**), um regulador secretado que modula a biodisponibilidade de **IGF-I** e **IGF-II** e molda a sinalização a jusante pelas vias **IGF1R–PI3K/AKT** e **MAPK**. Além do sequestro de ligantes, a IGFBP2 pode influenciar a adesão e a migração celulares por meio de interações com componentes da matriz extracelular, sustentando papéis no remodelamento tecidual e em programas de desenvolvimento. Alterações na expressão de IGFBP2 são frequentemente usadas como leitura molecular em estudos de homeostase metabólica, inflamação e redes de sinalização oncogênicas, nas quais se correlacionam com mudanças em proliferação, sobrevivência e fenótipos invasivos. Essas propriedades tornam o **Igfbp2** um nó valioso para dissecar a comunicação cruzada entre vias acionadas por fatores de crescimento em modelos murinos de doença.

IGFBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Igfbp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGFBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Igfbp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Igfbp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGFBP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Igfbp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGFBP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGFBP2 em células tumorais com expressão de Igfbp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.