IGF-I Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421056-ACT

O Igf1 de camundongo codifica o fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I), um hormônio peptídico secretado que integra a sinalização endócrina e parácrina para regular o crescimento somático, a homeostase do músculo esquelético e dos ossos, e o desenvolvimento neuronal. A ligação do IGF-I ao IGF1R ativa as cascatas PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, coordenando a síntese proteica, o metabolismo da glicose, a progressão do ciclo celular e programas de sobrevivência. Em modelos experimentais, alterações na expressão ou na sinalização de Igf1 estão associadas a fenótipos de crescimento, regeneração tecidual comprometida, desregulação metabólica e mudanças em processos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos. Essas vias também se cruzam com inflamação e remodelamento da matriz extracelular, tornando o Igf1 um nó-chave para estudar a biologia anabólica e as respostas ao estresse dependentes do contexto.

IGF-I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Igf1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGF-I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Igf1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Igf1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGF-I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Igf1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGF-I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGF-I em células tumorais com expressão de Igf1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.