IFITM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-428653

Visão geral

Ifitm5 codifica a proteína transmembrana 5 induzida por interferon (IFITM5), uma pequena proteína associada à membrana com expressão altamente restrita a células da linhagem osteoblástica e com papel fundamental na mineralização do esqueleto. A IFITM5 contribui para a diferenciação de osteoblastos e para a deposição da matriz extracelular, influenciando processos como a organização do colágeno e a formação de hidroxiapatita durante o desenvolvimento e a remodelação óssea. Alterações genéticas em IFITM5 estão ligadas a propriedades anormais da matriz óssea e têm sido associadas a fenótipos de osteogénese imperfeita, tornando-a relevante para estudos sobre fragilidade óssea e mineralização comprometida. Em modelos murinos, Ifitm5 oferece um ponto de entrada prático para dissecar vias intrínsecas aos osteoblastos que controlam a qualidade óssea e as respostas a sinais do desenvolvimento e a estímulos inflamatórios.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IFITM5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ifitm5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ifitm5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ifitm5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IFITM5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ifitm5 para a investigação da sinalização de IFITM5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ifitm5 críticos para a função IFITM5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ifitm5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo IFITM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo IFITM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ifitm5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo IFITM5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR IFITM5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ifitm5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ifitm5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.