Id4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401380-ACT

ID4（inhibitor of DNA binding 4）は、塩基性のDNA結合ドメインを欠くヘリックス・ループ・ヘリックス（HLH）型の転写制御因子をコードしており、Eタンパク質やその他のbHLH因子を隔離することで遺伝子発現を調節します。これらの相互作用を通じて、Id4は系譜選択、分化、細胞周期制御に影響を与え、発生における転写プログラムをクロマチンやシグナル伝達からの入力と結び付けます。ID4の活性は、神経新生、グリア発生、上皮分化などの過程と関連しており、増殖状態と分化状態のバランス形成に関与し得ます。ID4発現の破綻は、がんに関連するエピジェネティックな変化や異常分化表現型など、複数の疾患関連状況で報告されており、転写制御の機序研究における有用な注目点となっています。

Id4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ID4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Id4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ID4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はID4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Id4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のID4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるId4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびID4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるId4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。