IAP Double Nickaseプラスミド (h): sc-401544-NIC

ヒトALPIは腸管アルカリホスファターゼ（IAP）をコードしており、IAPは刷子縁（ブラッシュボーダー）に存在する外酵素として腸管腔内基質を脱リン酸化し、上皮バリアの恒常性維持に寄与します。IAP活性は、炎症誘導性をもつリン酸化微生物産物を解毒し、宿主—微生物相互作用を形成することで、粘膜の自然免疫調節とも交差し、腸管における下流の炎症シグナルに影響を与えます。ALPIの発現は腸上皮細胞（エンテロサイト）の分化や栄養素の取り扱いと密接に関連しており、IAP活性の変化は実験系において腸管炎症やディスバイオーシス関連表現型と関連づけられています。小腸上皮の機能マーカーとして、ALPIはバリア機能の維持、微生物の感知、上皮成熟を制御する経路を解析する際に頻繁に用いられます。

IAP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ALPI 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ALPI内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ALPIの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ALPIが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。