HuR/ELAV1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400141-NIC

ELAVL1 (HuR/ELAV1) codifica una proteina legante l'RNA che riconosce elementi ricchi in AU e regola l'espressione genica post-trascrizionale controllando la stabilità dell'mRNA, lo splicing, l'esportazione nucleare e la traduzione. HuR si sposta tra nucleo e citoplasma ed è modulata da vie di segnalazione sensibili allo stress e dalla fosforilazione, plasmando programmi genici coinvolti nella progressione del ciclo cellulare, nelle risposte al danno al DNA, nell'infiammazione e nella differenziazione. Stabilizzando i trascritti che codificano per citochine, fattori di crescita e regolatori della sopravvivenza, HuR integra regoloni di RNA che influenzano l'adattamento cellulare ai segnali del microambiente. Un'attività deregolata di ELAVL1 e un'alterata localizzazione di HuR sono state associate alla segnalazione oncogenica, a stati infiammatori cronici e a vie rilevanti per malattie neurodegenerative e cardiovascolari, a sostegno del suo ampio impiego come nodo meccanicistico nella biologia dell'RNA.

HuR/ELAV1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELAVL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELAVL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELAVL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELAVL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.