HSPA14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407280

Übersicht

HSPA14 (Hsp70-ähnliches Protein 1) ist ein Mitglied der HSP70-Chaperon-Familie, das die Proteinkontrolle (Protein Quality Control) unterstützt, indem es neu entstehende Polypeptide stabilisiert, die korrekte Faltung fördert und während zellulären Stresses Aggregation begrenzt. Es ist an Proteostase-Netzwerken beteiligt, die mit Translation, ribosomenassoziierter Chaperonierung und stressresponsiven Signalwegen verknüpft sind, welche die Erholung nach Hitzeschock und anderen proteotoxischen Belastungen koordinieren. Durch die Modulation des Gleichgewichts zwischen Faltungskapazität und dem Umgang mit fehlgefalteten Proteinen trägt HSPA14 zur zellulären Homöostase bei, etwa im Kontext von oxidativem Stress, ER–Zytosol-Proteostase-Crosstalk und adaptiver Stresssignalgebung. Eine fehlregulierte Chaperon-Aktivität und ein Ungleichgewicht der Proteostase werden häufig in der Krebsbiologie, bei neurodegenerativen Erkrankungen und in Modellen inflammatorischen Stresses untersucht, wodurch HSPA14 ein nützliches Ziel für mechanistische Untersuchungen zur Stressresilienz und Protein-Homöostase ist.

Das HSPA14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HSPA14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HSPA14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HSPA14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSPA14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HSPA14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSPA14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HSPA14-Exone abzielen, die für die HSPA14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HSPA14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSPA14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSPA14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HSPA14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSPA14 HDR-Plasmid (h) und HSPA14 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HSPA14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HSPA14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.