HSP 90α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400088-ACT

HSP90AA1 codifica a proteína humana de choque térmico HSP90α (HSP 90α), uma chaperona molecular abundante e dependente de ATP que estabiliza e promove o dobramento de uma ampla variedade de proteínas cliente, incluindo quinases, receptores de hormônios esteroides e fatores de transcrição. A HSP90α sustenta a proteostase e a adaptação celular ao estresse por meio da coordenação com co-chaperonas, da regulação da maturação proteica e do amortecimento de proteínas mal dobradas durante o choque térmico e outros estressores. Por meio de sua rede de clientes, a HSP90α se conecta a vias de sinalização como MAPK e PI3K–AKT, bem como a processos de controle do ciclo celular e resposta a danos no DNA. A expressão desregulada de HSP90AA1 ou a dependência dessa proteína é frequentemente estudada em contextos como a reprogramação da sinalização em células tumorais, a agregação proteica em doenças neurodegenerativas e respostas inflamatórias ao estresse, tornando-a um nó central para pesquisas mecanísticas de vias.

HSP 90α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSP90AA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSP 90α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSP90AA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSP90AA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSP 90α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSP90AA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSP 90α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSP 90α em células tumorais com expressão de HSP90AA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.